análisis de sangre

Inmunofijación: ¿Qué es? ¿Por qué corres? Resultados de G. Bertelli

generalidad

La inmunofijación es una prueba de laboratorio que permite la identificación y tipificación de las globulinas gamma presentes en una muestra biológica.

En detalle, el análisis permite estudiar, en la sangre o en la orina del paciente, las clases de inmunoglobulinas (IgA, IgG, IgM, IgE o IgD) y el tipo de cadena ligera kappa o lambda, según su movilidad electroforética específica. . Posteriormente, para la identificación de qué gammaglobulina está implicada, la inmunofijación implica la inoculación de antígenos específicos para el fragmento o el anticuerpo correspondiente ( antisuero anti-inmunoglobulina ): la presencia de la alteración sospechosa se confirma por la formación De un precipitado, visible a simple vista o bajo un microscopio.

Esta información es de gran importancia para establecer, en particular, el diagnóstico de enfermedades de células plasmáticas (gammapatías o discrasias de células plasmáticas). La inmunofijación es muy útil para la evaluación y el seguimiento del mieloma múltiple, la macroglobulinemia de Waldenström y la amiloidosis primaria (también llamada amiloidosis de cadena ligera).

¿Qué

La inmunofijación (o inmunoelectroforesis, también abreviada al acrónimo IFE ) es una técnica que puede determinar si y qué clase de inmunoglobulinas (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) o tipo de cadena ligera kappa o lambda, está presente en Exceso o defecto en el suero sanguíneo y en la orina del paciente.

Las cadenas ligeras kappa y lambda caracterizan el componente monoclonal, es decir, los anticuerpos con exactamente la misma estructura química.

Inmunofijación Sierica y Urinaria: ¿cuándo está indicada?

Las discrasias plasmacelulares o gammapatías son un grupo heterogéneo de trastornos, de etiología desconocida, caracterizados por:

  • La proliferación de un clon de células B es desproporcionada ;
  • Presencia en suero y / u orina de un tipo de inmunoglobulina (o su subunidad polipeptídica), estructuralmente y electroforéticamente homogénea ( monoclonal ).

Normalmente, las discrasias de células plasmáticas se diagnostican mediante electroforesis de proteínas en suero y orina, seguida de inmunofijación con suero (IFE).

Al mismo tiempo, se puede prescribir un análisis de sangre para medir la concentración total de inmunoglobulina (IgG + IgM + IgA).

Para obtener más información: Inmunoglobulinas: qué son, cómo se miden y valores de referencia »

Inmunofijación: principio básico.

La inmunofijación es un examen de dos fases (primero la electroforesis en gel de agarosa, luego la inmunoprecipitación con antisueros específicos ).

El primer paso de la inmunofijación es el mismo que el de la ELECTROFORESIS de proteínas (o protidogramma), por lo que es necesario recordar algún concepto:

  • La electroforesis es un análisis de laboratorio que permite determinar la cantidad de proteínas presentes en el suero sanguíneo u otras muestras biológicas y, para cada fracción, revela si hay alguna anomalía en términos de calidad. En particular, esta prueba permite separar proteínas en cinco grupos: albúmina, globulinas alfa 1, globulinas alfa 2, globulinas beta y globulinas gamma ; estas últimas se investigan más específicamente con inmunofijación.
  • La electroforesis es un método de separación basado en la diferente velocidad de migración de las partículas cargadas eléctricamente, a través de una solución y un medio de soporte inerte, bajo la influencia de un campo eléctrico, generado por una corriente continua. En la práctica, la prueba explota la carga eléctrica y la masa molecular de las proteínas presentes en la muestra del paciente. Bajo el impulso de un campo eléctrico, estas macromoléculas migran y se "agrupan" por tipo, respondiendo al estrés de una manera característica. El resultado ( patrón electroforético ) consiste en varios picos y curvas, a los que corresponden las fracciones de proteínas. Normalmente, el primer pico, más alto y más estrecho, es el de la albúmina ; A continuación, se observan los picos de las globulinas, mucho más bajos que la albúmina. El aumento o disminución en la amplitud e intensidad de los picos formados en la traza indican una mayor o menor presencia de las proteínas de cada categoría; Cuantas más proteínas estén presentes en una banda, mayor será el pico respectivo. En el caso de las globulinas gamma, si desea conocer la cantidad de cada una de las diferentes clases (IgA, IgM, IgG, etc.) deberá recurrir a la dosis única. En general, mientras más globulinas gamma estén presentes en una banda, mayor será el pico respectivo; la altura corresponde a la cantidad total de proteínas pertenecientes a una determinada categoría.
Para conocer los detalles: Electroforesis de Seroproote - Qué es, Indicaciones y Resultados »

LA INMUNIFICACIÓN DE LA VIGENCIA prevé:

1) Electroforesis en gel de agarosa : la muestra del paciente (suero u orina) se deposita en una tira electroforética, es decir, el soporte de migración (generalmente gel de agarosa). A través de la aplicación de un campo eléctrico, generado por una corriente continua, se obtiene la separación en diferentes bandas. En la práctica, cada tipo de gamma globulina presente en la mezcla (que está en la muestra del paciente) migra de acuerdo con la masa molecular y la carga eléctrica. La diferente movilidad electroforética de las globulinas gamma permite identificarlas (cada una de ellas coincide con una banda específica en la trayectoria electroforética) y observar cualquier anomalía.

2) Inmunoprecipitación con Antisueros Específicos (Fijación) : los antígenos específicos para un anticuerpo o un fragmento dado (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-luz kappa o anti-cadena ) se agregan individualmente a cada tira electroforética. Cadena ligera lambda). Si está presente una proteína monoclonal, la interacción del antígeno con el anticuerpo correspondiente producirá una banda estrecha (esto significa que el resultado es positivo) y la formación de un precipitado, visible a simple vista o bajo un microscopio. Finalmente, la muestra se procesa (es decir, se lava y se colorea) para eliminar las proteínas que no han precipitado, para obtener el secado del gel y proceder a la lectura de los resultados.

Por que si

¿Para qué es la inmunofijación?

La inmunofijación sérica es una prueba indicada para diagnosticar o monitorizar enfermedades caracterizadas por una alteración de la globulina gamma, especialmente cuando se trata de la producción del componente monoclonal ( gammapatía monoclonal ).

Para saber más: Gammapatías monoclonales: qué y qué son »

La inmunofijación es útil en casos de sospecha de discrasia plasmacelular y es esencial para el estudio de MIELOMA (y enfermedades relacionadas) y MGUS (acrónimo de "gammapatie monoclonal de significado incierto").

Este examen también permite evaluar la macroglobulinemia de Waldenström y la amiloidosis de cadena ligera ( AL ).

Inmunofijación: ¿cuándo se prescribe el examen?

La indicación de la inmunofijación es posterior a los hallazgos clínicos o de laboratorio que plantean la sospecha de cambios en los anticuerpos monoclonales o inmunoglobulinas en suero u orina.

Por ejemplo, esta prueba permite profundizar el resultado de la electroforesis seropro o urinaria: cuando en la trayectoria electroforética, las bandas que corresponden a las globulinas gamma se desvían de la normalidad, la inmunofijación identifica cuál de estas proteínas se altera, en términos de cantidad y calidad.

En resumen, la inmunofijación sérica se puede prescribir:

  • En el caso de que otras pruebas de laboratorio proporcionen un resultado anormal, en términos de ausencia o cantidades menores y más altas de proteínas plasmáticas de lo normal;
  • Cuando sospechamos la presencia de enfermedades caracterizadas por la producción de un componente monoclonal, tales como:
    • Mieloma múltiple y sus variantes;
    • Macroglobulinemia de Waldenström;
    • amiloidosis;
  • Cuando el paciente tiene síntomas y signos que causan la presencia de gammapatía monoclonal o mieloma múltiple, como:
    • Dolores óseos;
    • anemia;
    • Fácil fatiga;
    • Infecciones recurrentes;
    • Fracturas inexplicables.

En el caso de mieloma múltiple, la electroforesis de proteínas y la inmunofijación también son muy útiles para controlar el progreso de la enfermedad (seguimiento).

Inmunofijación: ¿en qué muestras se puede realizar?

Las muestras biológicas que pueden ser sometidas a inmunofijación son principalmente:

  • Suero (inmunofijación de suero);
  • Orina (inmunofijación urinaria);
  • Licor * (inmunofijación de licor).

* Nota : el líquido cefalorraquídeo o líquido es el líquido que impregna y protege el cerebro, la médula espinal, los nervios craneales y las raíces espinales.

Valores normales

Un resultado NEGATIVO de inmunofijación en suero y orina para globulinas gamma monoclonales o policlonales se considera NORMAL .

Gama globulina

Las gamma globulinas constituyen el 9-20% de las proteínas plasmáticas totales.

  • Valor de referencia de globulinas gamma : 0.9-1.4 g / dl

Con respecto a la concentración total de inmunoglobulinas ( IgG + IgM + IgA ), se cree que los valores entre 600 y 2300 mg / dl son normales.

  • Valor de referencia Inmunogobulina en suero :
    • IgA : 90-400 mg / dl
    • IgG : 800-1800 mg / dl
    • IgM : 60-280 mg / dl
    • IgD : 0.3-0.4 mg / dl
    • IgE : 20-440 mg / dl

Nota : el intervalo de referencia del examen puede variar ligeramente según la edad, el sexo y la instrumentación utilizada en el laboratorio de análisis. Por este motivo, es preferible consultar los rangos informados directamente en el informe. También se debe recordar que los resultados de los análisis deben ser evaluados en su conjunto por el médico general, que conoce el cuadro anamnésico del paciente.

Valores Altos - Causas

El aumento de las globulinas gamma puede ser:

  • Policlonal, si la producción de inmunoglobulinas es heterogénea, es decir, todos los componentes del rango de globulina, producidos o derivados de diferentes células plasmáticas, se ven afectados por el aumento;
  • Monoclonal, cuando las globulinas gamma se producen o derivan de un solo tipo (clon) de células plasmáticas.

El aumento en el rango de globulina policlonal puede estar asociado con:

  • Enfermedades inflamatorias crónicas;
  • Artritis reumatoide;
  • Lupus eritematoso sistémico;
  • Enfermedades crónicas del hígado (como hepatitis y cirrosis);
  • Infecciones agudas y crónicas;
  • Inmunizaciones recientes;
  • Algunas enfermedades del cáncer.

Los valores altos de gamma globulina monoclonal pueden indicar, en cambio, la presencia de:

  • Algunas neoplasias e inflamaciones crónicas;
  • Mieloma múltiple
  • linfoma;
  • Macroglobulinemia de Waldenström.

Un exceso de gamma globulina se llama hipergammaglobulinemia, mientras que una deficiencia se conoce como hipogammaglobulinemia .

Valores bajos - Causas

La reducción de las globulinas gamma puede indicar la presencia de diversas enfermedades genéticas del sistema inmunitario, incluida la agammaglobulinemia o una inmunodeficiencia secundaria (p. Ej., SIDA, insuficiencia renal, sepsis aguda y síndrome de Cushing).

La disminución de los valores de gamma globulina también puede depender de la ingesta de fármacos citostáticos, inmunosupresores y esteroides.

Como realizar

Inmunofijación Sierica

La inmunofijación sérica consiste en una extracción simple de sangre de una vena del brazo. El suero se obtiene por centrifugación de la muestra biológica; esto permite, de hecho, separar la fracción que contiene las células (parte corpuscular) de la parte líquida de la sangre (plasma). El suero sanguíneo está libre de factores de coagulación (fibrinógeno, factor VIII, factor V y protrombina).

Inmunofijación urinaria.

Para realizar la inmunofijación urinaria es necesario recolectar una pequeña cantidad de orina en un recipiente estéril especial. De acuerdo con las indicaciones del médico y del laboratorio, la muestra se puede recolectar sin un tiempo preciso ( aleatorio ) o dentro de las 24 horas .

Inmunofijación del licor.

El análisis requiere la extracción de una pequeña cantidad de líquido cefalorraquídeo, insertando una aguja, en la cavidad espinal ( punción lumbar ).

preparación

Inmunofijación: ¿cómo prepararse para el examen?

  • Antes de tomar muestras de sangre, algunos laboratorios pueden requerir un ayuno de al menos 10-12 horas. Durante este período de tiempo se le permite tomar una pequeña cantidad de agua.
  • La inmunofijación se puede realizar en la orina recolectada a una hora específica del día (al azar) o durante las 24 horas, por lo que es necesario obtener por adelantado los recipientes estériles apropiados.
  • En cuanto a la inmunofijación del licor, sin embargo, no se requiere una preparación especial.

¿Qué puede alterar el resultado del examen?

Algunos medicamentos pueden afectar el resultado de la inmunofijación, por lo que es recomendable informar al médico de cualquier tratamiento farmacológico en curso.

En los seis meses anteriores al examen, la administración de vacunas (inmunización) y el uso de medicamentos, como fenitoína, procainamida, anticonceptivos orales, metadona y gamma-globulinas terapéuticas, pueden aumentar la concentración de inmunoglobulinas. Otros medicamentos que pueden alterar el resultado de la prueba son los corticosteroides, la neomicina, el ácido acetilsalicílico y la clorpromazina.

Interpretación de resultados

El resultado de la inmunofijación se evalúa en combinación con el resultado de otros análisis. La interpretación del hallazgo depende del médico general o del especialista de referencia que puede identificar y reportar alteraciones a una gammaglobulina específica (por ejemplo, la banda que coincide con las inmunoglobulinas G) a ciertas enfermedades. Esta evaluación confirma o apoya la hipótesis diagnóstica: en general, la inmunofijación puede revelar un perfil de globulina gamma normal o identificar una proteína monoclonal o un modelo policlonal .

Una vez que se ha definido la enfermedad, la inmunofijación se puede realizar para:

  • Controlar la enfermedad a lo largo del tiempo, luego seguir el curso (seguimiento);
  • Verificar la efectividad del protocolo terapéutico .

Pros y contras de la inmunofijación

En comparación con la electroforesis de proteínas, inmunofijación:

  • Es más rápido : los resultados de la inmunofijación generalmente se obtienen dentro de tres horas;
  • Es más sensible (aunque ligeramente): la inmunofijación puede revelar una inmunoglobulina excluida de la electroforesis de proteínas, especialmente en concentraciones bajas (menos de 1 gramo / litro).

Además, inmunofijación:

  • Puede ser parcialmente automatizado ;
  • Es fácilmente legible e interpretable .

Sin embargo, la inmunofijación es más costosa que la electroforesis de proteínas y solo permite el análisis de globulina gamma .

Resultado normal

En la inmunofijación, un camino normal incluye:

  • Una banda que coincide con la inmunoglobulina G más oscura ( IgG );
  • Una banda correspondiente a la inmunoglobulina A más ligera ( IgA );
  • La ausencia de la banda para inmunoglobulina M ( IgM );
  • La banda kappa es más densa que la de la lambda (cadena ligera), con una relación de 2: 1.

En un resultado normal, las bandas son grandes y hay una reducción gradual y uniforme en la densidad del color hacia los bordes de la tira de inmunoelectroforesis.

Globulinas gamma policlonales

En algunos casos, todas las bandas de la inmunofijación se ocultan homogéneamente en la misma medida. Este modelo representa la presencia de inmunoglobulinas policlonales . También en este caso, las bandas son grandes y la transición a los bordes de la tira inmunoelectroforética es gradual. La banda de IgM, normalmente ausente, es ancha.

Globulinas gamma monoclonales

Cuando se puede identificar una banda estrecha con bordes afilados en la ruta de inmunofijación, significa que la búsqueda de componentes monoclonales es positiva .

La identificación de una inmunoglobulina monoclonal es útil en el diagnóstico de las siguientes condiciones:

  • Gammapatía monoclonal de importancia indeterminada (MGUS);
  • Mieloma múltiple
  • Macroglobulinemia de Waldenstrom;
  • Amiloidosis.

Además, la inmunofijación se puede usar para controlar la terapia en las discrasias de células plasmáticas (es decir, mieloma múltiple y macroglobulinemia de Waldenstrom). Si el nivel de proteína monoclonal disminuye o no es detectable después de la quimioterapia, puede indicar una respuesta al tratamiento . En contraste, una proteína monoclonal persistente a pesar del tratamiento es un signo de enfermedad refractaria .

Nota Un resultado negativo en la inmunofijación no siempre excluye una discrasia plasmacelular. Por ejemplo, un mieloma múltiple no secretor u oligosecretor múltiple puede dar resultados negativos tanto en la orina como en el suero. Por lo tanto, si la sospecha diagnóstica de gammapatía es todavía alta, se indica la determinación de la proporción de las Cadenas Libere de Light Kappa / Lambda (proporción K / L ).

Inmunofijación y diagnóstico de esclerosis múltiple.

La inmunofijación del líquido cefalorraquídeo (LCR) se prescribe cuando el médico sospecha la presencia de esclerosis múltiple . En este caso, la traza que se determina es característica, ya que resalta la presencia de las llamadas bandas oligoclonales . El resultado es reportado en el laboratorio como positivo . Se debe considerar que las bandas no se observan normalmente en la inmunofijación sérica, ya que se correlacionan con la producción de gamma globulinas intratecales .

Sin embargo, se debe tener en cuenta que este hallazgo no confirma necesariamente el diagnóstico, ya que otras afecciones pueden presentarse con bandas oligoclonales en el líquido cefalorraquídeo.

En otras palabras, la identificación de las bandas oligoclonales con la inmunofijación del licor es muy útil para apoyar el diagnóstico de esclerosis múltiple, pero debe ser confirmada por otras investigaciones . Otras afecciones que pueden proporcionar tales resultados son la inflamación del sistema nervioso central, que incluye: encefalitis relacionada con el VIH, neurosífilis, neurosarcoidosis, meningoencefalitis de Lyme, tumores malignos del SNC, neuromielitis óptica y mielitis transversa.